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影响ELISA试剂盒质量的原因
点击次数:240 发布时间:2018-09-21

ELISA试剂盒质量保证是一个复杂的过程,许多重要的环节都影响到检测的质量。在实验室,对试剂准备一般不太注意,通常的做法是,在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用,而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题,其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。 

因此,在ELISA测定中试剂的准备蕞为关键的是,在实验开始前,将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20min以上后,再进行测定,以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的,主要是为了在后面的温育反应步骤中,能使反应微孔内的温度较快地达到所要求的高度,以满足测定要求。其次,目前的商品ELISA试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制,因此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。 
此外,当试剂盒以OPD为底物时,则底物溶液应在反应显色前临时配制。 
重要的环节都影响到检测的质量 

一、方法学的影响 
ELISA测定模式包括以下几种:双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM抗体捕捉法、竞争抑制法,其中竞争抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作时差所引起的竞争等因素的影响,结果重复性较差,质量较难控制。 

二、试剂因素 
不同批次的ELISA试剂在制作过程中很难保证质量完全一致,即使是通过批批检的项目其检测结果也存在差异,因此必须选择和订购长批号的试剂,并保证保存条件。严格执行这一标准可以避免因试剂批号改变而重新建立质控体系及重新评估试剂的复杂过程,并且能够保证结果的稳定性;对于效期短、使用率低的试剂,应当小量分装,每次使用则取分装部分即可,避免反复冻融造成试剂的失效。 

三、样本因素 
标本干扰因素包括内源性干扰因素和外源性干扰因素,前者包括类风湿因子、补体、异嗜性抗体、自身抗体、溶菌酶等,后者包括标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长、标本凝固不全、冷冻标本的反复冻融等。 

四、ELISA试剂盒操作因素对ELISA结果的影响 
ELISA操作步骤复杂,操作不当将引起较大的误差。以下叙述各个步骤中的影响因素。 
1.加样 
2.温育 
3.洗涤 
4.显色 
5.比色 

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